Методы сбора мелких почвообитающих форм
Опубликовано: 03.09.2018
Сбор материала проводится выборкой проб дерна, почвы, мхов, лесной подстилки и других субстратов, заселяемых мелкими членистоногими и другими беспозвоночными. Стандартной пробой является площадка с поверхностью в 1 квадратный дециметр (10x10 см), выбираемая на глубину в 10 см. Для этого удобно пользоваться металлической рамкой с отточенным нижним краем и двумя ручками по бокам.
Равномерно вдавливая ее на нужную глубину, извлекают монолит почвы или дерна соответствующего объема. При необходимости его сначала подрезают ножом со всех сторон. Собранные пробы сразу же упаковываются, во избежание их пересыхания, в пластиковые пакеты или другие емкости и переносят в лабораторию. Для извлечения населяющих пробу беспозвоночных пользуются термоэклектором Тулльгрена или его упрощенными модификациями (рис. 66). В простейшем случае аппарат состоит из большой металлической воронки. На ее дно над горлом кладут мелкую сеть или сито и затем высыпают взятую пробу. Над воронкой помещают электрическую лампу или другой источник света и температуры, а под нею сосуд в виде чашки Петри, широкогорлой пробирки или блюдца с фиксирующей жидкостью. В качестве фиксатора используют воду, 70° спирт или заменяющие их жидкости. Лампочку располагают на расстоянии в 5-10 см от пробы, избегая слишком быстрого пересыхания субстрата. Принцип действия аппарата состоит в постепенном прогревании освещаемого субстрата. Избегая света и сухости все живые объекты стремятся уползти от его источника и выпадают из воронки в подставленную емкость с жидкостью. Они долго остаются на плаву, сохраняя подвижность и хорошо заметны под бинокулярной лупой при среднем увеличении. Извлечение объектов из фиксирующей жидкости проводят тонкой кисточкой, препаровальной иглой или пипеткой. Их переносят на предметное стекло для фиксации и приготовления микроскопических препаратов. Убирая сосуд с жидкостью и объектами для исследования и микроскопирования, необходимо подставить под воронку аппарата Тулльгрена другой сосуд для сбора клещей. Для выгонки клещей обычно достаточно нескольких часов или около суток в зависимости от структуры и влажности субстрата.
Если нет электричества, аппарат можно выставить на солнце, но тогда необходимо хорошо изолировать стенки воронки и емкость с фиксирующей жидкостью от света и нагревания. В крайнем случае можно просеивать субстрат на ситах (с диаметром отверстий в нижней секции не более 1 мм) и затем вручную разбирать порции пробы на белой бумаге. Пользуясь лупой или бинокуляром можно заметить крошечные темные точки или бисеринки медленно двигающиеся или остающиеся неподвижными. Клещи расползаются не сразу; некоторое время они находятся в состоянии танатоза. Во многих случаях для сбора клещей прибегают к другим способам — соскребыванию лишайников и мхов с коры деревьев, камней, скал или стряхиванию с растений на подостланное белое полотнище и ручному сбору с грибов и других объектов.
Для содержания клещей в лаборатории используют бюксы или цветочные горшки или небольшие камеры для отдельных особей. В качестве субстрата используются кусочки коры, мох, прелые листья, древесную груху или ломтики картофеля. Для поддержания высокой влажности эти емкости помещают в эксикаторы или кристаллизаторы, ежедневно проветривая их во избежание сильного развития плесени. Удобно дно емкостей залить гипсом или его смесью с активированным углем; в зависимости от этого фона хорошо заметны клещи с темными или светлыми покровами.
Для изготовления препаратов используют разные жидкости и растворы. Жидкость Удеманса состоит из 87 частей 70° спирта, 8 частей крепкой «ледяной» уксусной кислоты и 5 частей глицерина. Она хорошо расправляет и просветляет мелких членистоногих и нематод. Жидкость Кенике (5 частей глицерина, 2 — уксусной кислоты и 3 — воды) хорошо расправляет, но быстро мацерирует объекты. Жидкость Карнуа (6 частей абсолютного спирта, 3 — хлороформа и 1 — ледяной уксусной кислоты) предполагает последующее изготовление гистологических срезов. Чаще всего пользуются просто 70° спиртом, несколько деформирующим и сжимающим объекты, или молочной кислотой, обеспечивающих их при длительном воздействии.
Для постоянных микроскопических препаратов объекты сначала проводят через 15 % раствор едкого кали (КОН) или подогретую (до 50-60°) молочную кислоту. Они хорошо просветляют жесткие покровы клещей и нематод. В зависимости от их свойств и размеров, эту процедуру ведут DT получаса и более, контролируя ее ход под микроскопом. Затем промывают водой или слабым спиртом и помещают в жидкость Фора—Берлезе. Эта вязкая смесь состоит из хлоралгидрата (200 частей), гуммиарабика (30), глицерина (20) и дистиллированной воды (50). Можно пользоваться канадским бальзамом или пихтовым, но они плохо просветляют эбъекты. После этого препарат покрывают предметным стеклом, подкла- цывая под его углы мелкие песчинки, если объект выпуклый и объемный. Изготовленный препарат высушивают в горизонтальном положении при температуре до 45° в течении 2-3 суток. Высохший препарат можно хранить в вертикальном положении многие годы и столетия.